陆成把实验流程细致都看完后,又是在心里过了一遍,
其实这个实验就是骨肉瘤细胞中,MiRNA143可能通过影响HK2的活性,从而影响到骨肉瘤细胞的生长、侵袭和转移几个步骤。
MiRNA全称是MiA,也就是微小RNA,要证明其可以通过HK2基因从而影响到HK2蛋白的表达,就需要进行证明。
要知道,HK2是细胞获得能量的关键,也是葡萄糖能够被细胞利用产生能量的第一个步骤的关键酶。
大致的实验流程,大概可以分成以下几步。
第一步就是构建过表达MiRNA143的细胞系,也就是将含有大量MiRNA143的基因片段,转入到骨肿瘤细胞中,使得其MiRNA143量增加,假如其可以阻断HK2的活性,那么骨肉瘤细胞必然会存在能量供应不足的情况。
没有能量供应的骨肉瘤细胞必将会像是不吃饭的人一样,连基本的生存的都成了问题,怎么去造人?
哦不,是造细胞。
假如其可以促进HK2的活性,那么骨肉瘤细胞必然会存在能量供应充足,有了能量的情况下,那就相当于磕了“万艾可”,遍地撒种子,通宵打蛋完全不在话下,无限扩展,无限嚣张,到处而是二代……
同时,也要构建Si-MiRNA143的细胞系。SIRNA的全称是SmallinterferingRNA,也就是小干扰RNA,之所以有SIRNA这个名字就是它最先发现的人是外国人,母语是英文。
否则的话,它可能全称就变成了‘xiaoganraoRNA’,缩写可以写成XGRRNA。
这种干扰RNA的作用,也就是把肿瘤细胞中的小RNA的表达给阻滞掉,使得其少表达甚至是不表达。
这样就形成了和过表达小干扰RNA143相反的作用,这是对照组之一。
还有就必须要做空白的对照,那就是不做处理的骨肉瘤细胞,叫空白对照。
观察以上处理组和观察组的骨肉瘤细胞的生长情况,分别于对照组和空白对照组作一个对比,使得明眼人就能够看得出来他们之间的差异,从而佐证小干扰RNA143在肿瘤中的作用。
这是实验设计的情况。
再接下来,会通过测定其中葡萄糖和乳酸的含量,来初步检测各个组中骨肿瘤的活性。
因为葡萄糖必然是所有细胞能量代谢的基础,在培养瓶里,一定容积的葡萄糖是有限且等量的,消耗的多的,那么这个组的活性就越强,消耗越少的,活性就越弱。
而乳酸,则是葡萄糖通过了能量代谢之后的一个产物,产物越多,代表活性就越强,产物越少,活性越弱。
只要搞清楚这些原理,其实实验结果一展示出来,只要是个会认字的人就能够看懂。
科研并不是高大上的,让人不懂的,反而,每一个成果最终的展示,最好的目的就是能够让傻瓜都知道它的结果是这样子的,本质是揭秘……
……
搞清楚了这些之后,陆成就开始着手转染骨肉瘤细胞制作细胞系了。
过表达细胞系和沉默组细胞系虽然都会用到转染的步骤,但是转染的载体的选择,也是有一定细微的差异的……
陆成把准备工作都做好了之后,实验室里的一个学姐就看到了,然后问陆成说:“亲爱的陆,听说你现在是在做转染?”
陆成正在消毒操作所需的器械,听到就转头,看清楚来人正是凯瑟琳师姐,也是一个博士,传闻中实验室第二好看,第一车灯的那个美女师姐。
陆成点了点头:“是的凯瑟琳师姐,你是有什么地方需要我帮忙的吗?”
说话,其实是有艺术的,假如陆成说你有什么事情吗,那可能凯瑟琳就会说没有,但是如果他问有什么需要帮忙的,凯瑟琳肯定不会直接拒绝,可能心里一犹豫,就把操作机会给过来了。
陆成在这个方面,还是跟着许教授学过的,所以尽量地给对方拒绝的机会。
凯瑟琳笑着说:“你可真是个热情的师弟呢,是这样的,我之前的那两批细胞系做实验最终都失败了,就只剩下最后一个冻存管了,所以需要再转染一批。”
“如果陆你不介意的话,能不能帮我也做一批转染?”
陆成心里一喜,笑着说:“当然不介意,就只是多几个小操作而已,师姐你只要把你转染的目的细胞和需要转染的基因盒子给我就行,到时候我都会做好详细地标记,然后冻存之前还让你亲自检查一遍的。”
凯瑟琳在陆成话里面听到了热情和严谨,不禁说:“陆,你太客气了,你能够完成秦都没做出来的实验,而且肯尼师兄也是对你赞誉有词,我怎么可能不相信你的操作技术了?”
“如果到时候我不在实验室的话,你就直接冻存起来就好了,就放在秦的冻存盒里面,我已经和她说好了。”
“如果我在实验室里的话,我就直接把它冻存到我的冻存盒里面去,这样可以节省你不少的时间。”
陆成保证,且自以为很细心地道:“没问题的,师姐,我到时候拍照发给你。”
“陆,其实你就是想加我的的账号吧?”凯瑟琳却是有些玩味说了一句。
然后看到陆成微微一愣,她才意识到陆成才是个刚来的华国年轻小男生,又赶紧解释道:“不过我并不介意把我的的账号给你的哟。”
陆成暗自汗了一下,他还真没这个意思,他对凯瑟琳这款,一点都不感冒。
……
实验进行到第三天的时候,陆成虽然因为是新来的,大家又已经认可了陆成的操作能力,并且又想要给陆成更多的学习操作的机会,就陆陆续续地也把自己的实验带到了陆成这里来蹭车。
其实就是想偷懒,她们自己做厌倦了这些操作而已。
不过陆成几乎是来者不拒,只要是自己下一步操作需要做的事情,都接了下来,反正也就是多移动几下移液器的事情,浪费不了陆成多长时间。
所以陆成这两天操作最多的时候,有六个人的实验操作,都交给了陆成这个实验室新人。这个量,也就是让陆成的实际操作时间,从本来预计的半个小时延长到了三个小时而已。
问题并不大。
只不过,当陆成今天再次走进操作室的时候,一个人叫住了他。
“陆成!”